Real -Time PCR即實時監(jiān)測PCR擴增產(chǎn)物并進行解析的方法，它是在PCR反應體系中加入熒光物質，并通過Real -Time PCR檢測系統(tǒng)對PCR反應進程中的熒光信號強度進行實時監(jiān)測，最終對實驗數(shù)據(jù)進行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來，廣泛應用于生物研究的各個領域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。

PCR技術服務主要儀器及耗材：

旋渦振蕩器 ：上海青浦瀘西儀器廠產(chǎn)品

手握式電動勻漿機：德國FLUKO公司產(chǎn)品

低溫冷凍離心機：Sigma（3K15）公司產(chǎn)品

Real-time檢測儀：ABI（ABI-7300）公司產(chǎn)品

超純水分離系統(tǒng)：美國LABCONCO公司

離心管及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規(guī)耗材均為國產(chǎn)；RNA提取過程中所需的離心管、槍頭等耗材經(jīng)過0.1%的DEPC水浸泡過一夜，121℃滅菌30min，烘干后備用。

PCR技術服務實驗室試劑的操作：

1)所用的所有溶液都應該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

2)所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。

3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。

4)所用試劑都應該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。

5)所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。

6)新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。

7)樣品準備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。

本程序適用于自動PCR操作，可適用于大多數(shù)情況，所用酶是不含核酸外切酶活性的熱穩(wěn)定聚合酶，如Taq聚合酶等。
引物（各50pmol） 0.2mmol/L dNTPs（必須使用高質量的dNTPs，這一點非常重要。dNTPs經(jīng)反復化凍后會發(fā)生降解，因此應分成小份保存。應注意混合物中四種dNTP的量要相等。

所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于食用，醫(yī)療等其它用途。