雙鏈DNA中和緩沖液是怎么配的

產(chǎn)品名稱：雙鏈DNA中和緩沖液

規(guī)格：100ml/500ml

保存：室溫

有效期：12個(gè)月

用途：又稱為中性轉(zhuǎn)移緩沖液,僅用于雙鏈DNA的雜交

說(shuō)明：由Tris-HCl、氯化鈉組成，Ph7.4。

DNA 的雙鏈?zhǔn)且粋€(gè)完整的基因紐帶，在每個(gè)細(xì)胞核里都有一套，控制成長(zhǎng)規(guī)律。（除了紅血細(xì)胞之類的的細(xì)胞沒(méi)有 DNA）單鏈僅僅在細(xì)胞復(fù)制時(shí)才會(huì)有。細(xì)胞復(fù)制的過(guò)程中，紐帶將被打開(kāi)，由復(fù)制體從蛋白材料中取材，復(fù)制成單鏈 DNA 的另一半。從而產(chǎn)生新的細(xì)胞核。大部分DNA以雙螺旋結(jié)構(gòu)存在，但一經(jīng)熱或堿處理就會(huì)變?yōu)閱捂湢顟B(tài)。單鏈DNA就是指以這種狀態(tài)存在的DNA。單鏈DNA在分子流體力學(xué)性質(zhì)、吸收光譜、堿基反應(yīng)性質(zhì)等方面都和雙鏈DNA不同。某些噬菌體粒子內(nèi)含有單鏈環(huán)狀的DNA，這樣的噬菌體DNA在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)則形成雙鏈DNA。

使用緩沖液時(shí)應(yīng)注意的一些事項(xiàng)

1.向緩沖液中添加一些必要的穩(wěn)定劑(如巰基保護(hù)劑——乙醇、多元醇、甘油、蔗糖、乙二醇、DDT等),以保護(hù)生物大分子重要的活性基團(tuán)或空間結(jié)構(gòu)。

2.添加金屬離子或絡(luò)合劑,以保護(hù)對(duì)金屬離子敏感(需要或不需要)的生物大分子。有些酶需要兩價(jià)的金屬離子(如Ca++,Mg++,Mn++等)作為其輔因子;有些生物大分子則要時(shí)刻防范上述酶類(如DNase,Nuclease等)對(duì)它們的降解,故要向緩沖液中添加EDTA或EGTA 等螯合劑,以保護(hù)它們不被降解。

3.添加蛋白酶抑制劑。如我們要研究蛋白質(zhì)分子,在分離純化他們的過(guò)程中,必須時(shí)刻防止他們被蛋白酶所水解。為此可向緩沖液中添加PMSF或DFP(磷酸二異丙基氟),亮抑肽等。它們可分別抑制哺乳動(dòng)物蛋白酶或絲氨酸蛋白酶的活力。

4.蛋白質(zhì)添加劑:生物大分子需要有一定的濃度,才能保持其完整的空間構(gòu)像。因此,經(jīng)過(guò)一系列分離純化步驟而終得到純酶制品時(shí),有時(shí)其濃度很低。為保持這類濃度很稀的純酶的活力,往往要向這類酶制品(特別是一些商售的限制性核酸內(nèi)切酶)中人為地添加一些蛋白質(zhì),如牛血清白蛋白(BSA)或酪蛋白(Casein)等,從而既保護(hù)了目的酶的空間構(gòu)象又不影響其活力。

5.滲投壓:在組織和細(xì)胞的體外培養(yǎng)、保存或洗滌等實(shí)驗(yàn)中,除了溶液的酸堿度,營(yíng)養(yǎng)成分和與其它離子或化學(xué)成分的相互作用外,還要注意液體的滲投壓。低滲可導(dǎo)致溶血或細(xì)胞膜破裂,高滲引起細(xì)胞皺縮或抑制細(xì)胞代謝。有的緩沖對(duì)濃度稍高,即可因其與其它離子或化學(xué)成分相互作用而影響溶液的穩(wěn)定性或?qū)?xì)胞的功能產(chǎn)生副作用,因此,為了不使某一緩沖對(duì)的濃度過(guò)高,可以在同一個(gè)溶液中添加多個(gè)不同的緩沖系統(tǒng);為了保持溶液處于等滲狀態(tài),避免高滲或低滲的出現(xiàn),常通過(guò)添加氯化鈉等中性鹽的方法調(diào)整溶液的滲投壓。