明膠酶譜法分析試劑盒染色很關(guān)鍵！



產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）明膠酶譜法試劑盒操作簡(jiǎn)單，靈敏度高。上海信帆生物供應(yīng)的MMP試劑盒采用酶譜法（zymography）檢測(cè) MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法，其靈敏度可達(dá) 1 nM，高于 ELISA 方法,而且可檢測(cè)幾百個(gè)樣本。
 

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解 細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細(xì)胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組 織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的 MMP-2、MMP-9 參與各種生理與病理過程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視  。

本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測(cè) MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法，其靈敏度可達(dá) 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電 泳， 電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng) Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮區(qū)域，從而能同時(shí)指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。

本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測(cè)少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性，檢 測(cè)靈敏度~1 nM。試劑盒可進(jìn)行 50 次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè)，如果小膠加樣孔為 10~15個(gè)，則總計(jì)可檢測(cè) 500~750 個(gè)樣品。
 

明膠酶譜法分析試劑盒染色很關(guān)鍵！

染色步驟：

1. 此染色液即為工作液，使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝 膠，并緩慢搖動(dòng) 2h；

2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；

3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動(dòng) 2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至獲得清晰的 藍(lán)色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要 2～4h，也可脫色過一夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈 的背景）；

4. 對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在    7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對(duì) 凝膠進(jìn)行處理后保存。

安全性：含有甲醇，無特殊毒性，按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。

說明：

1. 染色液配方：0.25g 考馬斯亮藍(lán) R250 420ml 甲醇 100ml 冰乙酸，定容至 1000ml，混合 1h 后用 Whatman 1 號(hào)濾紙過濾，于室溫可無限期保存；

2. 脫色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

3. 保存液：7％冰醋酸；

4. 凝膠染色之后，染色液可以回收利用，裝入新容器內(nèi)，室溫或 4 ºC 保存，可反復(fù)使用 2-4 次。

明膠酶譜法分析試劑盒染色很關(guān)鍵！